影响蛋白电泳的因素
一个带电的蛋白质分子,其所以能在电场中移动以及其具有一定的移动速度,取决于其本身所带的电荷、电场强度、溶液的PH、粘度和电渗等因索的影响。
一、带电质点所带电荷:如上所说蛋白质由于绥冲液PH的不同,所带的电荷可正可负,在电场里向相反的电极移动。溶液的PH值离等电点越远,则移动的速度越快。蛋白质分子小而带电多者,移动速度较快。分子大而带电少者移动较慢。
二、电场强度:电场强度对电泳速度也起决定的作用,
所谓电场强度是每一厘米的电位降。例如滤纸电泳时,滤纸两端长为20厘米,测得的电位降为200伏特。则电场强度为200+20=10伏特/厘米。电场强度愈大,则带电质点移动愈快。
三、溶液的离子强度:溶液的离子强度越高,则蛋白质移动的速度愈慢,而且纸上电泳图谱各组分的距离缩短;反之,则移动快,纸上电泳图谱各组分的距离宽阔。纸上电泳绥冲液的离子强度一般是用0.02〜0.1之间。
四、电滲:电渗是和电泳同时发生的一种副作用。区带电泳的各种支持物(如滤纸、琼脂等)不是绝对中性的,在缓冲液中或多或少带有电荷。例如在纸上电泳的条件下,滤纸带有负电荷,因而与纸相接触的水溶液则带正电荷。
这种在电场中液体对于一个固定的固体相对移动的现象,称为电渗。此时进行电泳血淸蛋白在纸上随着电渗的液流向负极流动。血淸蛋白本身最带负电荷而向正极移动,因此其速度由于电渗的影响而减慢。
假使质点原是向负极移动,则其电泳速度加快。电渗的液流是均匀而缓慢,只是将电泳图谱中各个区带以相同的速度街动,因而对它们分离情况并没有显著的影响。
电渗的强弱决定于许多因素;绥冲液的pH浓度和滤纸的厚度,琼脂的纯度等都有影响。例如厚的滤纸和离子强度较低的绥冲液都可使电渗增加。琼脂的来源和净化的程度,对电渗很有关系。
五、电泳迁移率:电泳速度以厘米2秒/伏特表示,称迁移率。除了质点所带的电荷量及电场的强度之外,质点的形状和缓冲液的粘度对电泳的移速也有影响。
六、蒸发:蒸发是纸上电泳的一个重要千扰因素。由于滤纸电阻大,因而通电时产生一定的热鬼。如电压增大,发热更甚,滤纸上溶液的蒸发更多,产生纸上液流和绥冲液浓度增大,影响于血淸各种蛋白质的分离。因此,在临床检验室的纸上电泳装置,将滤纸置于密闭的电泳槽中,并且采用离子强度适当小的缓冲液和较低的电压和电流,使蒸发减弱不致影响各个蛋白组分的清晰分离。